人胚肺成纖維細胞(HELF)
本公司的細胞培養操作規程，供參考
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養箱濕度為 70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培 養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
人胚肺成纖維細胞(HELF)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的 培養基終止消化。輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘， 棄去上清液，加入lmL培養液后吹勻。移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養 基的T-75培養瓶中培養。
 
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行， 后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
 
注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
 
細胞特性：
1)來源：肺
2)形態：成纖維細胞，貼壁生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人胚肺成纖維細胞(HELF)細胞接受后的處理：
1.收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2.請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養約 2-3h〇
3.棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的*培養基。
4.如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。
5.接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得電聯。
細胞用途：僅供使用。